除少數(shù)培育基只需加熱溶解，不需高壓滅菌外，大部分培育基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。尤其是對無菌試驗培育基滅菌不完全，直接關(guān)系到試驗成果。因而有必要認真對高壓滅菌器進行滅菌作用的驗證。  1．試驗資料 

(1) 嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus  stearothermophilus) ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-l05 CFU/片。 (2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學指示卡。 

(3) 溴甲酚紫胨水培育基116℃高壓滅菌20分鐘后備用。 (4) 0-150℃留點溫度計。 2．辦法與成果 

將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中?；瘜W指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各預(yù)備5-10份。別離放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中心5處。如滅菌器為二層，則需放10處。 

留點溫度計標化合格后方可用于驗證試驗。檢測前，需將溫度計的水銀柱甩**40℃以下。每次監(jiān)測后留點溫度計的溫差應(yīng)存1℃之間，則闡明滅菌器內(nèi)的溫度散布是均勻的。 

滅菌后的菌片應(yīng)在嚴格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培育基內(nèi)56-60℃培育24-48小時，調(diào)查色彩改變。如培育基變?yōu)辄S色，闡明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細菌仍可在培育基中成長，分化葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培育基色彩不改變?nèi)詾樽仙瑒t闡明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培育基內(nèi)作為陽性對照，不加紙片的空白培育基作為陰性對照。 

化學指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時，由淡黃色變?yōu)楹谏?。跟著色彩改變的深淺，并與對照色比較，可判別滅菌作用是否到達要求?；瘜W指示卡應(yīng)在枯燥處保存。遇潮會變色，影響滅菌作用的觀測。 

高壓蒸氣滅菌有必要使蒸氣順利進入滅菌器內(nèi)，與滅菌物品觸摸，并將原有的冷空氣排出方可到達滅菌的作用。要進行空載熱散布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超越總體積的2/3)。二種驗證各重復(fù)三次，共做六次。5個點六次試驗標明溫度均在121℃，化學指示卡變黑；程度與對照色共同；培育基均未改變色彩，闡明高壓蒸氣滅菌作用合格。 

高壓滅菌器歸于強檢儀器，但強檢僅僅對儀器物理參數(shù)的查核。所以做過強檢的滅菌器還有必要進行滅菌作用的驗證。一些單位常常疏忽了這個重要的問題。G內(nèi)市售的手提滅菌器，往往儀器指針到達所需的溫度，但滅菌物品的實踐溫度卻未到達要求。導致滅菌物品不完全，影響試驗成果。培育基滅菌不完全，影響培育基的運用及成果判別。因而高壓蒸氣滅菌器無菌作用的驗證是一個有必要引起重視的問題。